1. Als ik een buis met bevroren cellen ontvang, kan ik deze dan direct in vloeibare stikstof doen voor opslag?
Cellen die op droogijs (-80°C) zijn getransporteerd, kunnen in veel gevallen weer in vloeibare stikstof worden geplaatst en daarna snel worden ontdooid.De levensvatbaarheid van de cellen kan echter worden verminderd na een dergelijke behandeling.Voor sommige gevoelige cellijnen kan dit celherstel bemoeilijken.Men denkt dat dit fenomeen het gevolg is van een verandering in de structuur van de ijskristallen in de cellen als gevolg van de temperatuurverandering.Daarom wordt aanbevolen cellen zo snel mogelijk na ontvangst te ontdooien en te kweken.Verkort de bewaartijd bij -80°C.Deze temperatuur wordt alleen gebruikt voor transport.
2. Welke veiligheidsmaatregelen moeten worden genomen bij het verwijderen van cellen uit vloeibare stikstof voor terugwinning?
Cryobuisjes in vloeibare stikstof die niet volledig zijn afgesloten en waarin vloeibare stikstof lekt, kunnen een explosie veroorzaken als de temperatuur van de cryobuis tijdens het ontdooien sterk stijgt.Het wordt daarom aanbevolen om een veiligheidsbril en beschermende handschoenen te dragen bij het verwijderen van cellen uit vloeibare stikstof.Voor reanimatie moet de vriesbuis continu worden geschud in een waterbad van 37 ° C om de vriesoplossing binnen 1-2 minuten volledig te ontdooien.Veeg daarna de buitenkant van de buis af met een alcoholdoekje, neem het dan in de ultraschone tafel en breng de cellen over naar een centrifugebuis met 10 ml kweekmedium toegevoegd, centrifugeer bij 1000 rpm gedurende 5-10 minuten, gooi de supernatant, voeg de juiste hoeveelheid kweekmedium toe en ent de kweekkolf en incubeer in een 5% CO2-incubator.
3. Waarom moeten cellen worden opgeslagen in de dampfase van een tank met vloeibare stikstof in plaats van in de vloeibare fase?
Cellen die zijn opgeslagen in de gasfase van vloeibare stikstof hebben meer kans om nieuw leven in te blazen.Terwijl in de vloeibare fase van vloeibare stikstof, als de lyofilisatiebuizen niet goed zijn afgesloten of lekken hebben, direct contact tussen de cellen en de vloeibare stikstof de levensvatbaarheid van de cellen na ontdooien in gevaar kan brengen.
4. Hoe verander ik het kweekmedium voor suspensiecellen?
Het kweken van suspensiecellen kan worden gedaan door eenvoudigweg vers medium toe te voegen (indien de ruimte dit toelaat) of door de cellen van het oude medium te scheiden door centrifugeren (100 xg gedurende 5 minuten) en vervolgens de geprecipiteerde cellen opnieuw te suspenderen in vers medium.Voor de meeste suspensiecellijnen is het eenvoudigweg toevoegen van medium echter een betere methode.Hoe dan ook, het medium moet worden vernieuwd voordat de cellen hun grootste verzadigingsdichtheid bereiken.De verzadigingsdichtheid van cellen varieert tussen 3 x 105 en 2 x 106, afhankelijk van de cellijn en kweekomstandigheden (rusten of roeren, oxygenatieniveaus, enz.).Cellen moeten worden verdund tot een lagere celconcentratie om voldoende nutriëntenterugwinning mogelijk te maken om de cellen logaritmisch te laten groeien.Als het medium eenvoudig wordt vervangen zonder de celdichtheid te verminderen, zullen de cellen het medium snel uitputten en afsterven.Als de cellen worden verdund tot onder hun kleinste dichtheid, komen ze in een lag-fase en groeien ze heel langzaam of gaan ze dood.Elke suspensiecellijn heeft een andere verzadigingsdichtheid en passage-interval, dus dagelijkse celtellingen zijn de manier om suspensiecellijnen* te controleren.
5. Wat is het aanbevolen CO2-gehalte voor celcultuur?
Hoewel de CO2-niveaus in celkweeksystemen variëren van 0,03% tot 40% (meestal rond de 0,03% CO2 in de atmosfeer), is het heel gebruikelijk dat er geen CO2 aan de lucht wordt toegevoegd of een CO2-concentratie van 5% tot 10%.Het is belangrijk om de concentratie natriumbicarbonaat in het medium aan te passen aan het CO2-gehalte in de gasfase.Cellen produceren CO2 en hebben een kleine hoeveelheid koolzuur nodig voor groei en overleving.Als er geen CO2 wordt toegevoegd en de cellen zich vermenigvuldigen, kan 4 mM (0,34 g/L) watervrij natriumbicarbonaat worden gebruikt.Het deksel van de kweekkolf moet op dit punt echter worden vastgedraaid.Als het kweeksysteem 5% of 10% CO2 nodig heeft, gebruik dan respectievelijk 23,5 mM (1,97 g/L) of 47 mM (3,95 g/L) natriumbicarbonaat bij 37°C, met een aanvankelijke pH van ongeveer 7,6.Onder deze omstandigheden moet de kolf open blijven of moet een petrischaal worden gebruikt om het gasevenwicht te handhaven.
6. Waarom hebben sommige cellen natriumpyruvaat nodig?Hoeveel natriumpyruvaat moet ik aan het medium toevoegen?
Pyruvaat is een metaboliet van organisch zuur in de glycolytische route* die gemakkelijk de cel binnenkomt en verlaat.Daarom levert de toevoeging van natriumpyruvaat aan het medium zowel een energiebron als een koolstofbron voor anabolisme, helpt het bepaalde specifieke cellen te behouden, helpt het bij celklonering of is nodig wanneer de serumconcentraties in het medium worden verlaagd.Natriumpyruvaat helpt ook de fluorescentie-geïnduceerde cytotoxiciteit te verminderen.Natriumpyruvaat wordt gewoonlijk toegevoegd in een eindconcentratie van 1 mM.in de handel verkrijgbare natriumpyruvaatoplossingen zijn gewoonlijk 100 mM opslagoplossing (100X).
Vertaald met www.DeepL.com/Translator (gratis versie).
Posttijd: 21 juni-2022